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細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)原理和操作步驟

細(xì)胞凍存與細(xì)胞復(fù)蘇，是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的常見工作。細(xì)胞凍存，是指將細(xì)胞貯存在超低溫環(huán)境中，使細(xì)胞暫時(shí)“冬眠”的技術(shù)，在需要的時(shí)候再進(jìn)行復(fù)蘇。細(xì)胞復(fù)蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細(xì)胞快速解凍，并使細(xì)胞重新恢復(fù)生長(zhǎng)的技術(shù)。本文將為大家介紹細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點(diǎn)和操作步驟。細(xì)胞凍存篇凍存原則細(xì)胞凍存原則為“慢凍”，即讓細(xì)胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細(xì)胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細(xì)胞會(huì)受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護(hù)劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異...

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細(xì)胞長(zhǎng)得慢、傳代不易貼壁，該怎么挽救？

各類細(xì)胞產(chǎn)品是我們做實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)，一支小小的細(xì)胞，關(guān)乎我們各種實(shí)驗(yàn)的成功與否，細(xì)胞的”小事情“，在實(shí)驗(yàn)中都是”大事情“，如果你的細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、不貼壁等情況，那你可要注意了，這就是細(xì)胞狀態(tài)不好的信號(hào)，要及時(shí)“挽救”，不然很有可能細(xì)胞就瀕臨死亡。問(wèn)題一：細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢細(xì)胞長(zhǎng)得慢是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中比較常見的問(wèn)題，一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞活力和濃度一直是細(xì)胞健康的標(biāo)志，細(xì)胞長(zhǎng)得慢的話，活力和濃度可能都會(huì)直線下降。造成細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的主要原因及解決方法：1，新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清，細(xì)胞不...

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Annexin V流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡的數(shù)據(jù)分析方法

示例：細(xì)胞用FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)效果圖。Jurkat細(xì)胞用1μM喜樹堿(Camptothecin)(左)或未加藥(右)處理4h，F(xiàn)ITC-AnnexinV/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒染色后，流式細(xì)胞儀熒光檢測(cè)。AnnexinV-FITC單陽(yáng)性細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞，AnnexinV-FITC和PI染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞為壞死細(xì)胞或者晚期凋亡。PI單染色陽(yáng)性位裸核細(xì)胞。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)可能會(huì)因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況，檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)...

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細(xì)胞傳代時(shí)間經(jīng)驗(yàn)技巧

養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴們都知道，細(xì)胞一定要傳代，因?yàn)榧?xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中不斷的繁殖，數(shù)量也隨之增加，然而培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細(xì)胞移至別的培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶，讓細(xì)胞有足夠生長(zhǎng)空間。細(xì)胞傳代也不僅僅是為細(xì)胞安一個(gè)更大的“家”，更重要的，是使細(xì)胞系或細(xì)胞株進(jìn)一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細(xì)胞做各種各樣的實(shí)驗(yàn)。但是，對(duì)于傳代的時(shí)間，很多小伙伴都掌握不好，因?yàn)閷?duì)于不同的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，判斷能否開始傳代的標(biāo)準(zhǔn)略有不同，今天，我們就主要來(lái)聊一下，細(xì)胞傳代的時(shí)間問(wèn)題。什么時(shí)候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的產(chǎn)生

胎牛血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。關(guān)于細(xì)胞生長(zhǎng)，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。那...

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細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號(hào)PB180436；2、制備好的細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞量；3、細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個(gè)凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細(xì)胞的取材和分離方法

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)的步驟一般是：取材→分離→培養(yǎng)和維持，今天我們重點(diǎn)介紹原代細(xì)胞的取材和分離方法。一、取材人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌③防止機(jī)械損傷④去除無(wú)用組織和避免干燥⑤應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟

細(xì)胞一般儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)196°C,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zuida限度的保存細(xì)胞活力。細(xì)胞復(fù)蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細(xì)胞恢復(fù)到一般的生長(zhǎng)狀態(tài),今天我們來(lái)看看原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟。一、檢查收到細(xì)胞株包裹時(shí),請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請(qǐng)立即處理告訴寄方。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細(xì)胞解凍1、依據(jù)細(xì)胞株說(shuō)明書zhiding的基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清...

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